Agar Mueller-Hinton

Medio no selectivo y no diferencial, de composición estandarizada, recomendado por CLSI y EUCAST para las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos por difusión con discos (método de Kirby-Bauer) y con tiras de gradiente, en bacterias aerobias de crecimiento rápido.

Fundamento

• Contiene infusión de carne, hidrolizado de caseína y almidón, que absorbe metabolitos tóxicos.
• Tiene bajo contenido de timina y timidina, que antagonizan a las sulfonamidas y al trimetoprim.
• La concentración de calcio y magnesio está controlada: influye en los halos de aminoglucósidos y tetraciclinas.
• El antimicrobiano difunde desde el disco y forma un gradiente; el diámetro del halo de inhibición se compara con los puntos de corte vigentes.

Condiciones de la prueba

Paso	Condición
Inóculo	Suspensión equivalente al 0,5 de McFarland
Siembra	Con hisopo, en tres direcciones, sobre toda la superficie
Discos	Colocar antes de 15 minutos de sembrar; incubar antes de 15 minutos de colocarlos
Incubación	35 ± 2 °C, en aerobiosis (sin CO₂), 16 a 18 horas
Lectura	Diámetro del halo en milímetros, interpretado con CLSI M100 o EUCAST

Características técnicas

Característica	Valor general
Tipo de medio	No selectivo, estandarizado para antibiograma
Formato	Placa de Petri lista para usar
Aspecto	Ámbar claro, transparente a ligeramente opalescente
pH final (25 °C)	7,2 – 7,4
Profundidad del agar	4 mm (± 0,5 mm)
Control de calidad sugerido	E. coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, con halos dentro de los rangos de CLSI M100; Enterococcus faecalis ATCC 29212 con trimetoprim-sulfametoxazol para verificar la timidina

Valores generales de la formulación; los del lote se confirman en el certificado del fabricante.

Para uso diagnóstico in vitro por personal de laboratorio. Siga siempre el inserto del fabricante.

Almacenamiento

• Conservar refrigerado entre 2 y 8 °C, en su empaque original cerrado. No congelar: el hielo rompe el gel y la placa suelta agua al descongelarse.
• Guardar las placas invertidas (el agar arriba y la tapa abajo), para que el agua de condensación no caiga sobre la superficie.
• Proteger de la luz directa y del calor; no dejar junto a la pared del fondo de la nevera, donde puede congelarse.
• Evitar cambios bruscos de temperatura: producen condensación dentro de la placa.
• Usar primero el lote que vence primero y no usar después de la fecha de vencimiento.
• Una placa deshidratada queda más delgada y da halos falsamente grandes: mantener siempre en su bolsa cerrada.

Manipulación

• Sacar de la nevera solo las placas que se van a usar y dejarlas alcanzar la temperatura ambiente antes de sembrar (unos 15 a 30 minutos, dentro de su bolsa).
• Sembrar sobre una superficie seca. Si hay gotas de condensación, secar la placa entreabierta e invertida en la incubadora o en cabina durante unos minutos.
• Trabajar con técnica aséptica (mechero o cabina de seguridad), sin tocar el agar y con la placa abierta el menor tiempo posible.
• Rotular en la base de la placa, no en la tapa.
• Devolver a la nevera las placas no usadas dentro de su bolsa cerrada, para que no se deshidraten.
• Descartar las placas usadas como residuo biológico, previa esterilización según las normas del laboratorio.
• La superficie debe estar húmeda pero sin gotas: el exceso de agua deforma los halos.
• No mover los discos una vez colocados: el antimicrobiano empieza a difundir de inmediato.
• No apilar más de cinco placas en la incubadora, para que todas alcancen la temperatura al mismo tiempo.

No usar la placa si

• Hay contaminación visible (colonias o película antes de sembrar).
• El agar está deshidratado: agrietado, adelgazado o despegado del borde de la placa.
• Hay cambio de color respecto al aspecto normal del medio, precipitados o exceso de agua.
• La placa está rota, el empaque llegó abierto o el lote está vencido.
• La profundidad del agar se ve desigual o claramente menor de 4 mm.

Limitaciones

• Para microorganismos exigentes se usan variantes suplementadas (con sangre, o Mueller-Hinton-F de EUCAST).
• Los resultados solo son válidos si se cumplen inóculo, tiempos, temperatura y control de calidad.
• Los puntos de corte cambian: usar la edición vigente de CLSI M100 o de EUCAST.

Referencias

• Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests. 13.ª ed. Documento M02. CLSI; 2018.
• Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. Suplemento M100 (edición vigente). CLSI.
• Bauer AW, Kirby WMM, Sherris JC, Turck M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. American Journal of Clinical Pathology. 1966;45(4):493-496.
• Mueller JH, Hinton J. A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 1941;48:330-333.
• Procop GW, Church DL, Hall GS, et al. Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7.ª ed. Wolters Kluwer; 2017.
• Tille PM. Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology. 15.ª ed. Elsevier; 2022.
• Zimbro MJ, Power DA, Miller SM, Wilson GE, Johnson JA, eds. Difco & BBL Manual: Manual of Microbiological Culture Media. 2.ª ed. BD; 2009.
• Clinical and Laboratory Standards Institute. Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media. Documento M22-A3. CLSI; 2004.

Contenido de referencia para profesionales del laboratorio de microbiología. Los datos propios del producto (lote, vencimiento, pH, control de calidad) se confirman en el inserto y el certificado del fabricante.