Agar Chocolate

Medio enriquecido y no selectivo para el aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes, en especial Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis, a partir de muestras clínicas (líquido cefalorraquídeo, secreciones respiratorias y genitales, hemocultivos positivos, entre otras).

Fundamento

• La base nutritiva se enriquece con hemoglobina o sangre lisada por calor, que le da el color marrón (no contiene chocolate).
• Al lisarse los glóbulos rojos quedan disponibles el factor X (hemina) y el factor V (NAD), indispensables para Haemophilus.
• Suele llevar un suplemento de vitaminas, aminoácidos y glucosa que favorece a las Neisseria patógenas.
• No tiene inhibidores: crece casi todo, por lo que en muestras con flora acompañante se usa junto con un medio selectivo (por ejemplo, Thayer Martin).

Lectura

Microorganismo	Aspecto habitual
Haemophilus influenzae	Colonias pequeñas, lisas, húmedas, grises o translúcidas; olor característico
Neisseria gonorrhoeae	Colonias pequeñas, grisáceas a blanquecinas, brillantes; oxidasa positiva
Neisseria meningitidis	Colonias medianas, grises, lisas, a veces mucoides; oxidasa positiva
Streptococcus pneumoniae	Colonias con halo verdoso (el medio no permite leer hemólisis)

Características técnicas

Característica	Valor general
Tipo de medio	Enriquecido, no selectivo
Formato	Placa de Petri lista para usar
Aspecto	Marrón chocolate, opaco, homogéneo
pH final (25 °C)	7,2 ± 0,2
Incubación	35 – 37 °C, con 5 % de CO₂ y humedad, 18 a 72 horas
Control de calidad sugerido	H. influenzae ATCC 10211 y N. gonorrhoeae ATCC 43069: buen crecimiento

Valores generales de la formulación; los del lote se confirman en el certificado del fabricante.

Para uso diagnóstico in vitro por personal de laboratorio. Siga siempre el inserto del fabricante.

Almacenamiento

• Conservar refrigerado entre 2 y 8 °C, en su empaque original cerrado. No congelar: el hielo rompe el gel y la placa suelta agua al descongelarse.
• Guardar las placas invertidas (el agar arriba y la tapa abajo), para que el agua de condensación no caiga sobre la superficie.
• Proteger de la luz directa y del calor; no dejar junto a la pared del fondo de la nevera, donde puede congelarse.
• Evitar cambios bruscos de temperatura: producen condensación dentro de la placa.
• Usar primero el lote que vence primero y no usar después de la fecha de vencimiento.
• El suplemento y los factores de crecimiento pierden actividad con el calor y el tiempo: respetar la cadena de frío y el vencimiento.

Manipulación

• Sacar de la nevera solo las placas que se van a usar y dejarlas alcanzar la temperatura ambiente antes de sembrar (unos 15 a 30 minutos, dentro de su bolsa).
• Sembrar sobre una superficie seca. Si hay gotas de condensación, secar la placa entreabierta e invertida en la incubadora o en cabina durante unos minutos.
• Trabajar con técnica aséptica (mechero o cabina de seguridad), sin tocar el agar y con la placa abierta el menor tiempo posible.
• Rotular en la base de la placa, no en la tapa.
• Devolver a la nevera las placas no usadas dentro de su bolsa cerrada, para que no se deshidraten.
• Descartar las placas usadas como residuo biológico, previa esterilización según las normas del laboratorio.
• Neisseria gonorrhoeae y Haemophilus no toleran el frío ni la desecación: nunca sembrar sobre una placa recién sacada de la nevera, y llevar a incubar de inmediato.
• Incubar en atmósfera húmeda con CO₂ (incubadora de CO₂ o jarra con vela).

No usar la placa si

• Hay contaminación visible (colonias o película antes de sembrar).
• El agar está deshidratado: agrietado, adelgazado o despegado del borde de la placa.
• Hay cambio de color respecto al aspecto normal del medio, precipitados o exceso de agua.
• La placa está rota, el empaque llegó abierto o el lote está vencido.
• El medio se ve reseco u oscurecido, o perdió el color marrón uniforme.

Limitaciones

• No es selectivo: la flora acompañante puede cubrir al patógeno.
• No sirve para leer hemólisis, porque los glóbulos rojos ya están lisados.
• La identificación siempre requiere pruebas adicionales (Gram, oxidasa, requerimiento de factores, pruebas bioquímicas o espectrometría).

Referencias

• Procop GW, Church DL, Hall GS, et al. Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7.ª ed. Wolters Kluwer; 2017.
• Tille PM. Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology. 15.ª ed. Elsevier; 2022.
• Zimbro MJ, Power DA, Miller SM, Wilson GE, Johnson JA, eds. Difco & BBL Manual: Manual of Microbiological Culture Media. 2.ª ed. BD; 2009.
• Clinical and Laboratory Standards Institute. Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media. Documento M22-A3. CLSI; 2004.

Contenido de referencia para profesionales del laboratorio de microbiología. Los datos propios del producto (lote, vencimiento, pH, control de calidad) se confirman en el inserto y el certificado del fabricante.